RWPE-1 人正常前列腺上皮細(xì)胞

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0066

細(xì)胞名稱：RWPE-1 人正常前列腺上皮細(xì)胞

英文名稱：Human Normal Prostate Epithelial Cells

別稱：RWPE1，RWPE 1

種屬來源：人

組織來源：前列腺正常細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：K-SFM + 0.05 mg/ml BPE + 5 ng/ml EGF+ 1% PS（a. 細(xì)胞在無血清培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，其貼壁能力較弱，建議傳代后靜置24小時再進(jìn)行后續(xù)操作。b. 細(xì)胞密度建議保持在4萬~ 7萬cells/cm2，接種密度建議在2萬~4萬活細(xì)胞/cm2。c. 使用0.05%胰酶消化細(xì)胞。同時由于K-sfm為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過添加2%FBS（用D-PBS稀釋）或等體積的0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化并離心去除胰酶，再進(jìn)行后續(xù)操作）

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：采用細(xì)胞凍存液，梯度降溫，液氮儲存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

一位54歲白人男性的正常前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細(xì)胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒18（HPV-18）進(jìn)行轉(zhuǎn)化，建立了RWPE-1。據(jù)報道，RWPE-1細(xì)胞在三維Matrigel培養(yǎng)時，在雄激素刺激下，形成腺胞（acini）并向培養(yǎng)基中分泌PSA。當(dāng)與Matrigel或基質(zhì)細(xì)胞混合注射雄性裸鼠時，RWPE-1細(xì)胞也能形成腺胞并產(chǎn)生PSA。來源于RWPE-1的細(xì)胞用Kirstin鼠肉瘤病毒（Ki-MuSV）轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞和 RWPE2-W99細(xì)胞。另外，用MNU處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進(jìn)程中不同時期的成瘤細(xì)胞株。它們分別是WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11和 WPE1-NB26細(xì)胞。據(jù)報道，RWPE-1細(xì)胞經(jīng)過檢測后發(fā)現(xiàn)乙肝病毒、丙肝病毒和人免疫缺陷病毒都呈陰性。PCR證實該細(xì)胞系HPV病毒DNA序列呈陽性。每個批次均通過本庫支原體檢測，結(jié)果陰性。在我?guī)焱ㄟ^STR鑒定，數(shù)據(jù)上94%吻合。STR結(jié)果如下：D5S818: 12,15；D13S317: 8,14；D7S820: 10,11；D16S539: 9,11；vWA: 18；THO1: 8,9.3；Amelogenin: X,Y；TPOX: 8,11；CSF1PO: 13

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0056

細(xì)胞名稱：T84 人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞

英文名稱：Human colon adenocarcinoma lung metastasis cells

別稱：T-84，T 84

種屬來源：人

組織來源：結(jié)直腸癌 取材轉(zhuǎn)移灶： 肺

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞，多角形

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：DMEM/F12 培養(yǎng)基＋5% FBS ＋1% P/S（生長時，這株細(xì)胞應(yīng)維持高密度生長，至少1/4滿）

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：細(xì)胞凍存液：95% *培養(yǎng)液 + 5% DMSO，梯度降溫，液氮儲存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0053

細(xì)胞名稱：RD 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞

英文名稱：Human Rhabdomyosarcoma Cells

別稱： R D，RD-2，RD 2，130T，130-T，130 T，TE-32，TE 32，TE32，TE 32.T，Te 32.T，人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞

種屬來源：人

組織來源：肌肉，橫紋肌肉瘤

細(xì)胞形態(tài)：紡錘形和大的多核細(xì)胞

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：89% DMEM 培養(yǎng)基 + 10% FBS + 1%雙抗

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：采用細(xì)胞凍存液，梯度降溫，液氮儲存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1. 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

1.1 在超凈臺中取配好的*培養(yǎng)液5ml到15ml離心管中放至室溫備用。

1.2 快速將干冰或液氮保存的細(xì)胞株，放入37℃的水浴鍋后不停晃動凍存管，使其解凍并達(dá)到37℃，此過程盡量保持在3分鐘內(nèi)完成。（備注：此處注意，管身或管內(nèi)的液氮揮發(fā)完后才可放入，否則有炸裂風(fēng)險）

1.3 將化凍的細(xì)胞液快速轉(zhuǎn)移至上述準(zhǔn)備好培養(yǎng)基中，1000rpm 、4min離心收集細(xì)胞并傳代，傳代方法如下：

2. 細(xì)胞傳代處理

2.1 待長滿瓶底至80%以上時，貼壁細(xì)胞棄掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用1X PBS洗兩遍。

2.2 加1mL 0.25%的胰酶溶液，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，直至看到有細(xì)胞從瓶底上脫落分離。

2.3 加入2mL*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打?qū)⑺屑?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落并轉(zhuǎn)移到離心管中，1000rpm 、4min離心收集細(xì)胞。

2.4 收集好的細(xì)胞用*培養(yǎng)基重懸，并輕輕吹打懸浮，若無特別說明，就按1:2~1:3的比例鋪新的培養(yǎng)瓶，放進(jìn)培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)（每個細(xì)胞培養(yǎng)條件不同，大部分細(xì)胞5%CO2、37℃恒溫培養(yǎng)）。

3.細(xì)胞凍存處理

3.1 收集方法同上，

3.2 收集好的細(xì)胞用細(xì)胞凍存液（若無特殊說明，一般細(xì)胞凍存液成分為：10%血清+80%培養(yǎng)基+10%DMSO）懸浮，并按4℃、1h，-20℃、30min，-80℃過夜，液氮長期的溫度梯度進(jìn)行保存。

細(xì)胞功能研究相關(guān)檢測：

2D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察

3D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察

原代細(xì)胞分離/培養(yǎng)/鑒定

細(xì)胞增殖/毒性檢測（MTT 法/CCK8 法）

細(xì)胞凋亡檢測（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）

細(xì)胞周期檢測（PI染料標(biāo)記流式法）

細(xì)胞遷移/侵襲檢測（劃痕法/Transwell法）

流式細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

細(xì)胞免疫熒光檢測

小管形成實驗（tube formation，體外血管生成實驗）

細(xì)胞克隆形成實驗

細(xì)胞外泌體分離與鑒定

慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

電生理檢測

個性化細(xì)胞實驗（藥物篩選等）

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